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品质保证 · AG九游会试剂

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技术服务

试剂盒实验操作视频

试剂盒实验视频操作


实验步骤：


1. 样品准备

裂解液（RIPA）准备-----每100 ul RIPA加入1 ul PMSF和1 ul的原钒酸钠溶液，现配现用。加入PMSF，加入原钒酸钠溶液。

组织样本-----黄豆大小组织剪碎，加入200-300 ul配备好的裂解液，冰上研磨，12000转离心5 min，取上清。

贴壁细胞-----6孔板一个孔长满，加150 ul配备好的裂解液，冰上裂解5-10 min，枪头吹打，吸取裂解好的样本，转入EP管，12000转离心5 min，取上清。

悬浮细胞-----细胞转入离心管，2000转离心5 min，弃上清，加入PBS清洗，2000转离心5 min，弃上清，每20 ul体系细胞加入150 ul裂解液，冰上裂解5-10 min，枪头吹打充分裂解，12000转离心5 min，取上清。

2. 蛋白浓度测定

标准曲线制备

待检样本上样

加入显色剂，室温避光20-30 min

酶标仪测定OD值

计算蛋白上样量（建议每样本上样总蛋白含量为50 μg）

3. 样本变性

每40 μL蛋白，加10 ul的5XSDS 上样缓冲液

沸水浴10 min

-20℃保存

4. SDS-PAGE胶制备

灌入分离胶

无水乙醇压平

分离胶完全聚合后，倒出无水乙醇

双蒸水冲洗

滤纸吸干

加入浓缩胶

插上梳齿

浓缩胶完全聚合后取出梳齿

5. 电泳

胶固定到电泳槽

倒入电泳液

加样，加marker,

电泳----80 V恒压至溴酚蓝到浓缩胶与分离胶交界处，改110 V恒压至溴酚蓝到凝胶底部