细胞 基本信息
细胞名称 | |
货 号 | TW-CC3712 |
细胞品牌 | AG九游会生物 |
种属来源 | 人 |
年龄性别 | 女 |
组织来源 | 肺 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞 形态 | 上皮细胞样 |
细胞代数 | 10代以内 |
细胞简介 | Luciferase NCI-H1975细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定,培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照,也可用于活体动物成像实验。NCI-H1975-LUC细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。NCI-H1975-LUC-EGFP细胞于1988年七月建株,组织提供者是一位非吸烟人士。 |
puro药筛浓度 | NCI-H1975-luc细胞puro药筛浓度为0.5g/ml,培养过程中可不用再添加puro,如若担心抗性随着传代时间降低,可定期用0.2ug/ml浓度puro维持。 |
生物安全等级 | 1 |
细胞规格 | 1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管 |
保藏机构 | ATCC; CRL-5908 |
培养基 | 90% MEM+10% FBS+PS |
培养条件 | 气相: 95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞货期 | 现货, 1周左右 |
发货方式 | 复苏发货( T25瓶免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) |
供应范围 | 仅限于科研实验使用,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
细胞培养操作
T25瓶 | |
收货处理 | 观察好细胞状态后, 75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h,以便稳定细胞状态 |
传 代密度 | 细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养 |
传代比例 | 首次传代建议 1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
传代方法 | a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b. 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化2-5 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 |
注意事项 | 1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 |
冻存管 | |
收货处理 | 收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
传代密度 | 第二天换液并检查细胞密度 |
传代比例 | 一管细胞建议接种到 10cm培养皿或者T25瓶 |
传代方法 | 将含有 1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)第二天换液并检查细胞密度。 |
| 1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存。 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
细胞冻存操作
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25瓶为例 |
冻存方法 | a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
售后服务
细胞予 | 1. 细胞运输中遭遇的各种问题,细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等, 重发。 |
2. 收到细胞未开封,如出现污染状况, 重发 。 | |
3. 收到细胞 3天内,发现污染问题,经核实后, 重发 。 | |
4 .常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货细胞复苏2天后,绝大多数细胞未存活,经核实后, 重发 。 | |
5. 常温发货的细胞静置 22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后,出现污染,经核实后, 重发 。 | |
6. 细胞活性问题,请在收到产品 3天内给AG九游会提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后, 重发 。 | |
细胞不予 | 1. 客户操作造成细胞污染, 不重发 。 |
2. 客户严重操作失误致细胞状态不好, 不重发 。 | |
3 .非AG九游会推荐细胞培养体系致的细胞状态不好, 不重发 。 | |
4. 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3天的细胞状态照片, 不重发 。 | |
5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的, 不重发 。 | |
6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于 3天的, 不重发 。 | |
特别说明 | 上海AG九游会生物客户在细胞培养过程中 ,有任何技术问题可以拨打免费服务电话 : 021-54845833 ,AG九游会随时给予实验中的免费解答。 |